产品货号:
BM0029
中文名称:
MluI限制性内切酶
英文名称:
LightFlash MluI Restriction Endonuclease
产品规格:
100T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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LightFlash快速内切酶是一系列经过基因工程重组的快速限制性内切酶,适用于质粒DNA、PCR产物或基因组DNA等的快速酶切。所有LightFlash快速内切酶在通用的CutFlash或CutFlash Color Buffer中都具有优良的活性,能够在5~15分钟内完成酶切。此外,百奥莱博的快速碱性磷酸酶、T4 DNA快速连接酶在CutFlash Buffer中均具有100%活性,支持一管化反应,提升“酶切-修饰-连接”的体验。
CutFlash Color Buffer包括红色和黄色示踪染料,可将产物直接用于凝胶电泳。CutFlash Color Buffer的红色染料与2500bp双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近;黄色染料与10bp双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近。
5'…A▼C G C G T…3'
3'…T G C G C▲A…5'
组分 | 规格 |
LightFlash MluI | 100μL |
10×CutFlash Buffer | 1mL |
10×CutFlash Color Buffer | 1mL |
1×CutFlash Buffer,37℃温育,可在5~15min内完成反应。
80℃加热20min。
- 功能活性检测:37℃下,在20μL通用CutFlash反应体系中,1μL LightFlash MluI能够在15min内完全消化1μg λDNA。
- 超长时间温育检测:37℃下,在20μL通用CutFlash反应体系中,将1μL LightFlash MluI与1μg λDNA共同温育3h,未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解。更长时间酶切可能出现星号活性。
- 酶切-连接-再酶切检测:37℃下,使用10倍酶量的LightFlash MluI消化DNA底物,回收酶切产物,在22℃下使用T4 DNA Ligase (Fast)可以将超过95%的酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后,使用相同的内切酶可以重新切开95%以上的连接产物。
- 非特异性内切酶活性检测:37℃下,在20μL通用CutFlash反应体系中将1μL LightFlash MluI与1μg超螺旋质粒DNA共同温育4h后,使用琼脂糖凝胶电泳检测,少于10%的质粒DNA转变成缺刻或线性状态。
- 不同DNA中的酶切位点数量
λDNA ΦX174 pBR322 pUC57 pUC18/19 SV40 M13mp18/19 Adeno2 7 2 0 0 0 0 0 5 - 甲基化修饰影响
Dam Dcm CpG EcoKI EcoBI 无影响 无影响 剪切受阻 剪切受影响 剪切受影响 - 在不同反应缓冲液中的活性
CutFlash Buffer FastDigest Buffer CutSmart Buffer QuickCut Buffer 100% 75% 100% 100%
- DNA快速酶切流程
- 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系:
注*:本体系适用于经过纯化的PCR产物酶切。未纯化的PCR产物具备一定的离子强度,10×CutFlash Buffer加入量可适当减少至2μL。但由于DNA聚合酶同时具有外切酶活性,会影响酶切产物,因此如下一步需进行克隆等操作,建议酶切前对PCR产物进行纯化。成分 质粒DNA PCR产物 基因组DNA ddH2O 15μL 16μL 30μL 10×CutFlash Buffer 2μL 3μL* 5μL 底物DNA 2μL (up to 1μg) 10μL (~0.2μg) 10μL (5μg) LightFlash MluI 1μL 1μL 5μL 总体积 20μL 30μL 50μL - 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋),然后瞬时离心以收集挂壁液滴;
- 37℃温育15min(质粒),或15~30min(PCR产物),或30~60min(基因组DNA);
- 80℃温育20min即可使酶失活,停止反应(可选);
- 如果使用CutFlash Color Buffer进行酶切反应,得到的产物可以直接进行上样电泳。
- 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系:
- 双酶切或多酶切
- 每种快速内切酶的用量为1μL,并根据需要适当扩大反应体系;
- 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10;
- 如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同,应先以最适温度低的酶开始酶切,再添加最适温度较高的酶,在其最适反应温度下进行酶切反应。
- 适用于质粒的扩大反应体系
注:如果总反应体系大于20μL,应适当增加温育时间,尽量使用水浴、金属浴或沙浴。DNA(μg) 1 2 3 4 5 LightFlash MluI(μL) 1 2 3 4 5 10×CutFlash Buffer(μL) 2 2 3 4 5 总体积(μL) 20 20 30 40 50
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